酶標儀選購的幾個(gè)關(guān)鍵參數！

核心提示： 酶標儀作為一個(gè)常用的儀器，其基本功能不外乎一個(gè)比色測定，與比色計所不同的是在測定波長(cháng)范圍、吸光度范圍、光學(xué)系統、檢測速度、震板功能、溫度控制、定性和定量測定軟件功能等方面的差異，當然全自動(dòng)酶免疫分析系統還具有自動(dòng)洗板、溫育、加樣等功能。我們在選購酶標儀時(shí)應該考慮如下幾個(gè)關(guān)鍵參數：

濾光系統

酶標儀可以用濾光方式來(lái)劃分。一般來(lái)說(shuō)，可以分為濾光片型和光柵型兩大類(lèi)。也有一些酶標儀里面同時(shí)裝上了濾光片和光柵。但是濾片和光柵并不能同時(shí)完成同一個(gè)檢測，本質(zhì)上還只是把濾片和光柵放在了一起，并沒(méi)有使兩者糅合而產(chǎn)生新的技術(shù)突破。

光柵型濾光系統具有使用方便，可以進(jìn)行光譜掃描，靈活性等優(yōu)點(diǎn)。當然，濾光片系統也有其顯著(zhù)的優(yōu)勢，例如價(jià)格較為便宜，檢測靈敏度高，帶寬的可選擇性，可以進(jìn)行快速的濾光片切換，可配備有自動(dòng)加樣系統，在化學(xué)發(fā)光檢測中光線(xiàn)的透過(guò)率高。

目前，濾光片系統應用更廣，因為它可以讓實(shí)驗者完成更多的試驗。

測定波長(cháng)

一般酶標儀的測定波長(cháng)在400～750nm或800nm之間，可以滿(mǎn)足ELISA的顯色測定。目前國內常見(jiàn)的ELISA試劑盒所使用的標記用酶均為辣根過(guò)氧化物酶(HRP)，底物通常為四甲基聯(lián)苯胺(TMB)和鄰苯二胺(OPD)，其在過(guò)氧化氫溶液的存在下，經(jīng)HRP作用，分別氧化為2，2，—二氨基偶氮苯(DAB)和聯(lián)苯醌。當pH值為5．0左右時(shí)，DAB在450nm波長(cháng)處有最大吸收，當pH值降為L(cháng) 0時(shí)，最大吸收波長(cháng)移至492 nm，同時(shí)摩爾消光系數變大，顯色加深，因而常用強酸如硫酸或鹽酸終止反應。TMB的氧化產(chǎn)物聯(lián)苯醌在波長(cháng)450nm處有最大消光系數，如果HRP量少，H：O：和TMB過(guò)量時(shí)，則形成藍色的陽(yáng)離子根。降低pH，即可使藍色的陽(yáng)離子根轉變?yōu)辄S色的聯(lián)苯醌，使用硫酸作為終止劑可使產(chǎn)物穩定90min。因此，450nm和492 nm兩個(gè)波長(cháng)是目前ELISA測定很常用的。各種酶標儀都配有放置濾光片的可自動(dòng)轉換的部件，可以同時(shí)安裝6～8片濾光片，所配備的濾光片均應包括上述兩個(gè)波長(cháng)，有的酶標儀以490nm濾光片替代492nm濾光片，影響不大。除了這兩個(gè)基本濾光片外，考慮到雙波長(cháng)比色的需要，還應有620nm或630nm或650nm和405nm波長(cháng)的濾光片，其他濾光片可根據自己的需要選擇。有時(shí)，有的實(shí)驗室希望用酶標儀作微量生化測定，故酶標儀生產(chǎn)廠(chǎng)家對其生產(chǎn)的酶標儀擴展了紫外檢測功能，此時(shí)需要一個(gè)340 nm波長(cháng)濾光片。此時(shí)，酶標儀的測定波長(cháng)范圍就成為340—750nm或800nm。

酶標儀有單波長(cháng)和雙波長(cháng)檢測功能。有時(shí)使用者不知在什么情況下使用單或雙波長(cháng)檢測。所謂的“單波長(cháng)”就是使用一種對顯色具最大吸收的波長(cháng)即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測定；而“雙波長(cháng)”則除了用對顯色具最大吸收的波長(cháng)即450 nm或492 nm進(jìn)行比色測定外，同時(shí)用對特異顯色不敏感的波長(cháng)如630 nm進(jìn)行測定，酶標儀最后打印出來(lái)的吸光度則為二者之差。630 nm波長(cháng)下得到的吸光度是非特異的，來(lái)自于板孔上諸如指紋、灰塵、臟物等所致的吸收。因此，在ELISA比色測定中，最好使用雙波長(cháng)，且不必設空白孔。

測定的吸光度范圍

通常，酶標儀的吸光度測定范圍在0～2.5之間即可以滿(mǎn)足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0～2.5之間，但現在基本上都做了拓寬，可達到3.5以上，并且能保持很好的精密度與線(xiàn)性。因此，對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍，主要要看在一定的吸光度范圍內的線(xiàn)性和精密度如何。

光學(xué)系統

酶標儀的光學(xué)系統采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道，亦有單通道)檢測，一般為硅光管或光導纖維，除測定通道外，有的酶標儀還有一個(gè)參比通道，每次測定可進(jìn)行自我校準。酶標儀的光學(xué)系統功能如何，均可通過(guò)酶標儀測定的吸光度范圍、線(xiàn)性度、精密度和準確度等體現出來(lái)。光學(xué)系統好的話(huà)，則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關(guān)系。單通道可避免因通道不同所致的差異。

檢測速度

酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時(shí)間。檢測速度快，有利于提高檢測的精密度，即避免由于測定過(guò)程中，因測定時(shí)間不同所致的各微孔間吸光度間的差異。目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的酶標儀檢測速度都非?？?，通常在數秒鐘內。

震板功能

酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISA板孔進(jìn)行比色測定前對其進(jìn)行振蕩混勻，使板孔內顏色均一。目前市場(chǎng)上常見(jiàn)的酶標儀均有震板功能，所不同的是震板方式，有的可按上下、左右或旋轉等方式及振蕩幅度等任意調節；有的則較為固定。使用有震板功能的酶標儀，在進(jìn)行ELISA測定顯色反應完成加入終止劑后，可不必振蕩混勻，直接放人酶標儀上測定即可。

溫育功能

溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動(dòng)精確地控制儀器內部的溫度，使得ELISA測定中微孔板條的溫育過(guò)程可在儀器內部完成，而無(wú)需再外配溫箱。目前，只有少部分酶標儀具有此種功能，溫育功能只是酶標儀的一個(gè)附加功能，是否具有并不能說(shuō)明酶標儀檔次的高低及儀器的優(yōu)劣。作為實(shí)驗室是否選擇，則可根據自己實(shí)驗室的條件及需要來(lái)決定。

軟件功能

軟件功能是指酶標儀所具有的對ELISA定性和定量測定及其他測定方式如酶標動(dòng)力學(xué)、紫外和凝集等數據的統計分析并報告結果的功能。軟件功能是中高檔酶標儀的一個(gè)非常重要的功能。如果硬件方面區別不大，則軟件就成為判定酶標儀優(yōu)劣的惟一指標。對于用戶(hù)來(lái)說(shuō)，好的軟件功能，對實(shí)際工作會(huì )有較大的幫助。ELISA定性測定，酶標儀如具有陽(yáng)性判斷值(cut-off)及其測定“灰區”(即指測定吸光度處于cut—off周?chē)囊欢▍^域，此區域內結果應為“可疑”)的統計計算功能，不但方便了實(shí)驗室工作人員，而且在某些特定的情況下，有很高的實(shí)用價(jià)值。因此，如目的是定量測定，則在酶標儀的軟件功能中，最好要有這種曲線(xiàn)回歸方程計算分析功能。其他諸如連點(diǎn)、直線(xiàn)等回歸計算，則可根據酶標儀的應用目的而定，如兼用于微量生化測定，則此類(lèi)回歸計算就很有必要。

此外，酶標儀兼做酶標動(dòng)力學(xué)、凝集反應測定所需的軟件是否應具備，當然也應根據使用目的而定。由于此類(lèi)軟件一般都較為昂貴，酶標儀常另外單獨按需配備，如果不是實(shí)驗室特殊需要，就不必強求這種軟件功能。 

語(yǔ)言界面

通常進(jìn)口的中高檔酶標儀人機對話(huà)多采用英文。這對于某些基層實(shí)驗室可能會(huì )存在語(yǔ)言方面的困難，從而難以最大限度地發(fā)揮酶標儀的作用。為解決這方面的問(wèn)題，已有一些酶標儀采用了中文界面。這樣就大大方便了廣大基層實(shí)驗室技術(shù)人員的使用。

綜上所述，盡管酶標儀的發(fā)展極為快速，種類(lèi)繁多，功能也不斷加強，但其最根本的功用是不變的，即比色測定。大凡比色測定，其基本要求就是在一定吸光度范圍內要有好的測定準確性、線(xiàn)性和精密性。同樣的吸光度范圍，測定的準確性、線(xiàn)性和精密性越好則酶標儀亦越佳。

而且，由于用于酶標儀比色測定的為多孔(通常為96孔)微孔板條，為保證測定的孔間重復性，則測定速度也是一個(gè)較重要的性能指標。至于其他如震板、溫育及有關(guān)的軟件功能，則是選配功能，不影響酶標儀其他的使用性能。